Introducción al Laboratorio.

 

Descripción

Un laboratorio de Microbiología es un lugar habilitado para manejar y estudiar microorganismos.

El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estándares técnicos y de seguridad propios de un laboratorio de Microbiología Clínica.

Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para evitar contaminaciones que den lugar a resultados erróneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaución por su potencial patogenicidad.

Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que deben ser esterilizados posteriormente.

Nunca se puede tirar nada contaminado por el fregadero o al cubo de la basura común sin haber sido esterilizado previamente.

En el laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de vertidos:

Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido con solución desinfectante (alcohol 70%, desinfectante fenólico diluido, etc.). Aclarar con agua los restos de desinfectante.

En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas metálicas, limpiar posteriomente para evitar el efecto corrosivo.

En caso de derramamientos de material peligroso o formación de aerosoles: evitar inspiraciones de esos aerosoles, esperar 30 minutos hasta que las partículas se hayan depositado y limpiar con mascarilla, guantes y otros útiles protectores.

En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con desinfectante y posteriormente cubrir con papel humedecido con desinfectante. Dejar durante 15 minutos y limpiar. En caso necesario aclarar con agua.

En caso de derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel humedecido y posteriormente aclarar, cuando sea necesario.

Los laboratorios deberán disponer de los aparatos e instrumental necesario para el correcto desarrollo de su actividad.
Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiología Clínica que implique la monitorización de los medios e instrumentos, con el fin de asegurar la adecuada realización de los aislamientos, identificación y caracterización de los patógenos y la realización precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos como referencia terapéutica. El sistema de la calidad deberá contemplar la existencia de registros de formación de personal.

es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de protección personal en el manejo de equipos y aparatos.

Los equipos del laboratorio deben funcionar de forma que se asegure la reproducibilidad de los resultados de las pruebas diagnósticas.

El laboratorio deberá estar bajo la dirección y responsabilidad de un facultativo con la especialidad correspondiente, legalmente capacitado para realizar aquéllas determinaciones clínicas que el laboratorio tenga autorizadas.

El personal técnico y sanitario del laboratorio deberá disponer la titulación adecuada para las funciones que desarrolla de conformidad con la legislación vigente.
 

Estructura de un laboratorio de Microbiología Clínica

 

Área administrativa

Área de recepción de muestras

Área de extracción que deberá:

Disponer de material de un solo uso para contacto con muestras biológicas.
Disponer de un área de extracciones y toma de muestra, una sala de espera para los pacientes y los servicios de higiene correspondientes.
Disponer de personal legalmente autorizado para la toma de muestras.
Disponer de un manual de extracción, toma y transporte de muestras.

El manual antedicho deberá ser elaborado por el responsable

Área de trabajo: análisis y procesado de muestras

El puesto de trabajo debe debe de estar limpio y ordenado

El material necesario debe prepararse antes de empezar a trabajar y colocarse de forma adecuada para que se facilite su utilización asi se evitarán accidentes y se minimizará el riesgo de contaminación

Nunca se debe pipetear con la boca. Utilizar siempre elementos manuales o automáticos.

Todo el material utilizado debe estar estéril.

 

1. Elementos y materiales más frecuentes de un laboratorio de Microbiología Clínica
 

1.1. Mesas de laboratorio y fregadero

 

1.2. Vitrinas y armarios

 

1.3. Mechero Bunsen

Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10-15cm de la llama del mechero (zona aséptica).

En caso de utilizar mechero nunca se debe coger material por encima de la llama

Antes de comenzar a trabajar se procurará disponer de todo el material necesario para el procesamiento de la muestra

Tomar las medidas necesarias para evitar la contaminación de las muestras o/ y cultivo por microorganismos ambientales
 

1.4. Gradillas

 

 

1.5. Estufa de incubación

Es una cámara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos.

Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura óptima de crecimiento (generalmente 35-37º).
 

 

 

1.6. Frigorífico o cámaras refrigeradas

Se utilizan para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos.

Generalmente están a una temperatura fija de 4ºC.

 

1.7. Congeladores

Se utilizan para la conservación de reactivos y microorganismos a temperaturas inferiores a 0ºC, llegando a -80ºC (los más frecuentes son -20º, -40º y -80º).

 

1.8. Microscopio óptico

 

 

 

1.9. Centrífuga

Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza centrífuga lo que permite la separación de los distintos componentes de la muestra mediante la precipitación en el fondo del tubo de las partículas en suspensión.

 

1.10. Cámaras de seguridad biológica (ver practica 2)

 

1.11. Desionizador de agua.

La mayor parte de los trabajos que se realizan en un laboratorio de Microbiología Clínica necesitan la utilización de agua pura con el fin de evitar cualquier tipo de interferencia. Entre otra característica debe: estar exenta de materiales en suspensión o a un pH comprendido entre 5,0 y 7,5. Durante años se ha utilizado agua destilada, en la actualidad los destiladores se han ido abandonando para dar paso a desionizadores que funcionan con resinas de intercambio iónico. También se pueden utilizar otras técnicas como la ósmosis inversa.

 

 

1.12. Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminación de la placa y una lupa, nos permite observar con mayor nitidez las colonias y por tanto facilita su recuento.

 

 

1.13. Balanzas

 

1.14. Baños termostáticos: son recipientes que contienen agua y un sistema de regulación de la temperatura. Se utilizan para atemperar medios de cultivo o incluso para incubar cultivos de microorganismos.

 

1.15. Agitador/ mezclador

vortex	agitador horizontal

 

1.16. Jarras de anaerobios:

Recipientes que se usan para conseguir una atmósfera libre de oxígeno para el cultivo de microorganismos anaerobios.

 

1.17. Asas de siembra:

Se utilizan para sembrar. Pueden ser metálicas o de plástico, curvas o rectas (para la siembra por picadura).

 

 

1.18.  pH-metros:

 

 

 

1.19. Material fungible

 

Placas de Petri: recipientes para la preparación de medios de cultivo sólidos

 

Placas de Petri con medio sólido

 

Tubos con medio líquido

 

Tubos con medio sólido

 

Pipetas de vidrio, de plástico y pipeteadores.

 

 

 

Pipetas

 

 

Pipeteador automático	Pipeteador manual

 

Pipetas automáticas (micropipetas) y puntas de pipeta:

Se utilizan para pipetear pequeñas cantidades de líquidos.

Se utilizan con puntas desechables de distinto tamaño y color según la micropipeta. Existen cuatro tamaños: de 0,5-2µm; de 2-20 µm; de 20-200 µm y de 200-1000 µm.

 

 

Asas acodadas o Asas de Digralsky:

Se utilizan para la extensión de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.

 

Portas y cubres

Para realizar las observaciones al microscopio.

 

Vasos de precipitados y matraces

 

Cucharas y espátulas:

Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo.

Área de limpieza de material y eliminación de residuos

 

Zona donde se procede a la esterilización mediante autoclave del material utilizado. El material desechable se elimina y con el material reciclave se procede a la eliminación de residuos y lavado. De esta manera el material queda dispuesto para ser utilizado.
 

Área de esterilización

Procedimiento por el que se consigue la muerte de todos los organismos vivos y  formas de resistencia en un objeto o producto tratado.

 

Autoclave

Es el equipo más utilizado.

Es un procedimiento de esterilización mediante calor húmedo. Se realiza en al autoclave durante 15 ó 20 min, según el volumen, a 115°C ó 121°C, según la naturaleza del material que se desee esterilizar.

Autoclavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presión (a 1 atmósfera). Como tiene gran poder de penetración la temperatura y el tiempo utilizados son menores que los que se emplean con el horno Pasteur (121º C, 15-20 minutos).

Se utiliza para esterilizar: Medios de cultivo, ropa, material de plástico resistente al calor húmedo, objetos de metal que no se alteren con la humedad y sobre todo material de vidrio.

 

Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180º C) durante un tiempo prolongado (1.5 a 3 horas). Debido a su poca capacidad de penetración se usa para esterilizar vidrio y metales. Actúa principalmente desnaturalizando las proteínas y secundariamente oxidando los compuestos celulares.

 

 

Área de preparación de medios

Almacén de reactivos
Área de seguridad microbiológica

Debe ser una zona diferenciada y aislada para la manipulación de microorganismos susceptibles de formar aerosoles potencialmente infecciosos.